ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การศึกษาเอนไซม์ Fructose-1,6-Bisphosphate Aldolase เพื่อเป็นเป้าหมายยาต้านวัณโรค

หน่วยงาน สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การศึกษาเอนไซม์ Fructose-1,6-Bisphosphate Aldolase เพื่อเป็นเป้าหมายยาต้านวัณโรค
นักวิจัย : กมลชนก รักเสรี , Kamolchanok Rukseree
คำค้น : Biological sciences , Fructose-1,6-Bisphosphate Aldolase , Pharmacology , Pharmacology and pharmacy , Tuberculosis , ยาต้านวัณโรค , วัณโรค , ศูนย์พันธุวิศวกรรมและเทคโนโลยีชีวภาพแห่งชาติ , สาขาวิทยาศาสตร์เคมีและเภสัช
หน่วยงาน : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2549
อ้างอิง : http://www.nstda.or.th/thairesearch/node/2581
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

ผู้วิจัยได้พัฒนาระบบสำหรับผลิตเอนไซม์ fructose-1,6-bisphosphate aldolase (FBA) ของเชื้อวัณโรคใน E.coli BL21(DE3) โดยการโคลนยีนที่มีการเติม histidine codons ต่อจาก C-terminal ของยีน fba (C-His-rMtFBA) ซึ่งช่วยให้เอนไซม์ที่ถูกผลิตขึ้นง่ายต่อการทำบริสุทธิ์ในขั้นตอนเดียวโดย การใช้ Ni2+affinity chromatography ทั้งนี้เอนไซม์ในรูป native form (Native-rMtFBA) ก็ได้ถูกผลิตและทำบริสุทธิ์โดย conventional methods พร้อมกันไปด้วย จากนั้นจึงได้นำเอนไซม์ทั้งสองแบบที่ผ่านการทำบริสุทธิ์แล้ว มาศึกษาคุณสมบัติต่างๆ พบว่ามีคุณสมบัติความใกล้เคียงกันทั้งในด้าน น้ำหนักโมเลกุลของเอนไซม์ในสภาพธรรมชาติและหน่วยย่อย, ค่าความเป็นกรด-ด่าง และ อุณหภูมิ ที่เหมาะสมในการทำงานของเอนไซม์, และ ความคงทนต่อสภาพความเป็นกรด-ด่าง และความร้อน ส่วนการศึกษาทางด้านจลศาสตร์พบว่า ค่า Km และ specific activity มีความแตกต่างกันน้อยมาก ซึ่งแสดงให้เห็นว่า histidines ที่มีเพิ่มนั้นไม่มีผลต่อความสามารถในการทำงานของเอนไซม์ ซึ่งบ่งบอกว่าระบบการผลิตและทำบริสุทธิ์ที่รายงานไว้นี้ นอกจากจะช่วยให้สามารถผลิตเอนไซม์ FBA ได้ในปริมาณมากเพื่อนำไปประยุกต์ใช้ในการพัฒนาการตรวจกรองหาสารยับยั้ง เอนไซม์โดยวิธี target-based assay แล้วยังช่วยในการศึกษาต่อเพิ่มถึงโครงสร้างโปรตีนด้วยการตกผลึก และประโยชน์อื่นๆ อีกเช่น การทำบริสุทธิ์ mutated เอนไซม์ เพื่อศึกษาและปรับปรุงคุณสมบัติบางอย่างของเอนไซม์ต่อไปในอนาคต เป็นต้น สำหรับ C-His-rMtFBA นั้น ได้ถูกนำไปใช้พัฒนาการตรวจวัดระดับเอนไซม์แบบ colorimetric assay อันจะเป็นประโยชน์ต่อไปในการพัฒนาเป็นวิธีตรวจกรองหาสารยับยั้งเชื้อวัณโรค แบบ high throughput screening ในรูปแบบ 96-well plate วิธีการตรวจวัดนี้ได้ถูกดัดแปลงมาจากวิธีของ Sibley และ Lehninger โดยการลดปริมาณของสารที่ใช้ลงและเปลี่ยนใช้สารที่ให้สีคงอยู่ดีขึ้น วิธีที่ดัดแปลงนี้ ง่าย น่าเชื่อถือ และจำเพาะกว่าวิธี NADH-linked assay เพื่อพิสูจน์ความสำคัญของยีน fbaในเชื้อวัณโรค การแสดงออกของยีนนี้ในเชื้อวัณโรคได้ถูกยับยั้ง โดยวิธี allelic exchange และ โดยวิธีทดสอบความสามารถของสารที่มีฤทธิ์ยับยั้งการทำงานของเอนไซม์นี้ โดยดูถึงผลในการยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อวัณโรคเทียบกับภาวะปกติ ผลพบว่าสาร 5-chloro-8-hydroxyquinoline นอกจากจะมีค่า selectivity index เป็นที่น่าพอใจแล้ว ยังมีประสิทธิภาพดีในการต้านการเจริญของเชื้อวัณโรคที่ไวต่อยา, ดื้อต่อยาแต่ละชนิด และดื้อต่อยาหลายขนาน โดยไม่มีความแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติของค่าMICs ซึ่งแสดงว่าสารนี้มีเป้าหมายแตกต่างจากยารักษาวัณโรคอื่นๆ ซึ่งผลที่ได้สอดคล้องกับผลจากวิธี allelic exchange คือ ยีน fba มีความสำคัญต่อการเจริญเติบโตของเชื้อวัณโรค อย่างไรก็ดียังอาจต้องมีการทดลองพิสูจน์เพิ่มเติมต่อไป

บรรณานุกรม :
กมลชนก รักเสรี , Kamolchanok Rukseree . (2549). การศึกษาเอนไซม์ Fructose-1,6-Bisphosphate Aldolase เพื่อเป็นเป้าหมายยาต้านวัณโรค.
    ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ.
กมลชนก รักเสรี , Kamolchanok Rukseree . 2549. "การศึกษาเอนไซม์ Fructose-1,6-Bisphosphate Aldolase เพื่อเป็นเป้าหมายยาต้านวัณโรค".
    ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ.
กมลชนก รักเสรี , Kamolchanok Rukseree . "การศึกษาเอนไซม์ Fructose-1,6-Bisphosphate Aldolase เพื่อเป็นเป้าหมายยาต้านวัณโรค."
    ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ, 2549. Print.
กมลชนก รักเสรี , Kamolchanok Rukseree . การศึกษาเอนไซม์ Fructose-1,6-Bisphosphate Aldolase เพื่อเป็นเป้าหมายยาต้านวัณโรค. ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ; 2549.