ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การศึกษาคุณสมบัติทางชีวเคมีของเอนไซม์ Catalase และเอนไซม์ Nitrate Reductase และ Ritrite Reductase ในแบคทีเรียแลคติคและการศึกษาทางพันธุวิศวกรรมของเอนไซม์ ในแบคทีเรีย Lactobacillus plantarum

หน่วยงาน สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การศึกษาคุณสมบัติทางชีวเคมีของเอนไซม์ Catalase และเอนไซม์ Nitrate Reductase และ Ritrite Reductase ในแบคทีเรียแลคติคและการศึกษาทางพันธุวิศวกรรมของเอนไซม์ ในแบคทีเรีย Lactobacillus plantarum
นักวิจัย : รุจ วัลยะเสวี , Ruud Valyasevi
คำค้น : 37 06 0137 , Biological sciences , Catalysts , Fermentation , Food , Food science and technology , Nitrates , Nitrites , ศูนย์พันธุวิศวกรรมและเทคโนโลยีชีวภาพแห่งชาติ , สาขาวิศวกรรมศาสตร์และอุตสาหกรรมวิจัย , อาหารหมักดอง , แบคทีเรียแลคติก
หน่วยงาน : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2539
อ้างอิง : http://www.nstda.or.th/thairesearch/node/2206
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

เชื้อแบคทีเรียที่แยกได้จากอาหารไทยหมักดองนั้นสามารถจำแนกเป็น 4 กลุ่ม คือ lactobacilli, pediococci, staphylococci และ micrococci จากผลการทดสอบ Activity ของเอ็นไซม์ coagulase และจาก hemolysis ของเม็ดเลือดแดงพบว่ากลุ่มเชื้อ staphylococci นี้ไม่ใช่เชื้อ staphylococcus aureus ผลจากการตรวจสอบสายพันธุ์เชื้อที่สร้างสาร H2O2 ได้โดยวิธี MDO agar plate พบว่า 75% ของเชื้อในกลุ่ม lactobacilli และ pediococci และ 39% ของเชื้อในกลุ่ม staphylococci และ micrococci ที่สามารถสร้างสาร H2O2 จากการตรวจสอบเชื้อแบคทีเรียที่มี activity ของเอ็นไซม์ catalase พบว่า 87% ของเชื้อ Lactobacillus plantarum, L. pentosus, L.sake, L.fermentum, Lactobacillus spp. , Pediococcus pentosaccus, P. acidilactici Pediococcus spp. สามารถสร้างเอ็นไซม์ true catalase เมื่อนำมาเปรียบเทียบกับเชื้อในกลุ่ม aerobe ในสายพันธุ์ staphylococci และ micrococci พบว่าทุกเชื้อในสายพันธุ์นี้มี pseudocatalase activity ซึ่งแตกต่างจากเอ็นไซม์ true catalase ที่ผลิตโดยเชื้อแบคทีเรียแลคติกแอสิก เอ็มไซม์ true catalase นี้มีการทำงานแบบ heme-dependence enzyme ในส่วนของเชื้อในกลุ่ม Micrococcaceae ซึ่งผลิตเอ็นไซม์ pseudocatalase นั้น เอ็มไซม์นี้มีการทำงานแบบ heme-independence จากการศึกษาค่า specific activity ที่ initial velocity ของเชื้อ L. plantarum, L. pentosus Staphylococcus sp. และ Micrococcus sp. พบว่าเอ็นไซม์ catalase จากเชื้อในกลุ่ม Micrococcaceae มี specific activity สูงกว่าเชื้อ lactobacilli ประมาณ 5-100 เท่า เอ็นไซม์ catalase จากเชื้อทั้ง 2 กลุ่มนี้ Lactobacillaceae และ Micorcoccaceae เป็นเอ็นไซม์ ที่ความเป็นกรด-ด่าง ไม่มีผลกระทบต่อ activity ในระหว่างค่า pH 5-10 ลำดับ nucleotide ในสาย oligonucleotide primers ซึ่งได้มาจากการศึกษาลำดับ nucleotide ของยีนเอ็นไซม์ catalase ของเชื้อ L.sake LTH 677 primers ที่มีละดับ nucleotide ดังกล่าวนี้สามารถเพิ่มปริมาณขึ้น DNA ของยีนในเชื้อสายพันธุ์เดียวกัน แต่ไม่สามารถเพิ่มปริมาณชิ้น DNA ของยีน catalase ในสายพันธุ์อื่น ๆ ของเชื้อ L. plantarum, L.pentosus, P. pentosaceus และในกลุ่ม Micrococcaceae การจัดทำ restriction enzyme mapping โดยใช้เอ็นไซม์ Acc I, Eco RI , Hae III พบว่าตำแหน่งของ restriction sites ของยีน catalase แตกต่างกันในแต่ละสายพันธุ์ เชื้อ L. sake แยกจากแหล่งต่าง ๆ เมื่อนำยีน catalase จากเชื้อ L. sake BTEC 890 มา clone ใน DNA พาหะ pMEx-8 และนำเข้าเชื้อ E. coli UM2 พบว่ายีน catalase สร้างแถบโปรตีนที่มีโมเลกุลขนาดประมาณ 65 Kda และสามารถตรวจสอบการแสดงออกของยีน catalase ในการใช้ H2O2 ชิ้น DNA ของยีน catalase ดังกล่าวนี้จึงถูกนำมา clone เข้า DNA พาหะ pIL1020 และนำเข้าสู่เชื้อเจ้าบ้าน L. plantarum ผลการทดลองพบว่าปริมาณ copy number ของ DNA พาหะลดลงประมาณ 5-10 เท่า และจากการวิเคราะห์โปรตีนไม่สามารถตรวจพบแถบโปรตีนเอ็นไซม์ catalase ที่มีขนาดโมเลกุล 65 Kda โดยวิธี SDS-Polyarcylamide Gel Electrophoresis จากการตรวจสอบเชื้อแบคทีเรียที่สามารถสร้างเอ็นไซม์ nitrate reductase และ nitrite reductase พบว่า เชื้อในกลุ่ม lactic acid bacteria ที่มีเอ็นไซม์ดังกล่าวนี้ทั้งหมด 19 เชื้อ แยกได้จาก ผักและผลไม้หมักดอง 17 เชื้อ และจาก แหนม 2 เชื้อ เชื้อทั้งหมดนี้เป็นสายพันธุ์ L. pentosus นอกจากนี้ยังพบว่า 71% ของเชื้อในกลุ่ม Micrococcaceae นั้นมีเอ็นไซม์ nitrate reductase และ nitrite reductase ด้วย เอ็นไซม์ nitrite reductase ที่พบสามารถแบ่งออกได้เป็น 2 ประเภท คือ heme-dependence และ heme-independence นั่นคือเอ็นไซม์จากเชื้อ L. pentosus จะต้องมีสาร hematin เป็นส่วนประกอบเพื่อให้เกิดปฏิกิริยา ใช้สาร lactate เป็น election donor และโดยมี end product คือ สาร ammonia ส่วนเอ็นไซม์ประเภทที่สองซึ่งพบในเชื้อของกลุ่ม Micrococcaceae นั้นมีเอ็นไซม์ nitrite reductase ชนิด heme-independence ซึ่งให้ end product คือ NO และ N2O

บรรณานุกรม :
รุจ วัลยะเสวี , Ruud Valyasevi . (2539). การศึกษาคุณสมบัติทางชีวเคมีของเอนไซม์ Catalase และเอนไซม์ Nitrate Reductase และ Ritrite Reductase ในแบคทีเรียแลคติคและการศึกษาทางพันธุวิศวกรรมของเอนไซม์ ในแบคทีเรีย Lactobacillus plantarum.
    ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ.
รุจ วัลยะเสวี , Ruud Valyasevi . 2539. "การศึกษาคุณสมบัติทางชีวเคมีของเอนไซม์ Catalase และเอนไซม์ Nitrate Reductase และ Ritrite Reductase ในแบคทีเรียแลคติคและการศึกษาทางพันธุวิศวกรรมของเอนไซม์ ในแบคทีเรีย Lactobacillus plantarum".
    ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ.
รุจ วัลยะเสวี , Ruud Valyasevi . "การศึกษาคุณสมบัติทางชีวเคมีของเอนไซม์ Catalase และเอนไซม์ Nitrate Reductase และ Ritrite Reductase ในแบคทีเรียแลคติคและการศึกษาทางพันธุวิศวกรรมของเอนไซม์ ในแบคทีเรีย Lactobacillus plantarum."
    ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ, 2539. Print.
รุจ วัลยะเสวี , Ruud Valyasevi . การศึกษาคุณสมบัติทางชีวเคมีของเอนไซม์ Catalase และเอนไซม์ Nitrate Reductase และ Ritrite Reductase ในแบคทีเรียแลคติคและการศึกษาทางพันธุวิศวกรรมของเอนไซม์ ในแบคทีเรีย Lactobacillus plantarum. ปทุมธานี : สำนักงานพัฒนาวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแห่งชาติ; 2539.