ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การศึกษาโปรตีน PlpB 39-kDa จากเชื้อ Pasteurella multocida และบทบาทในการสร้างความคุ้มโรค

หน่วยงาน สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การศึกษาโปรตีน PlpB 39-kDa จากเชื้อ Pasteurella multocida และบทบาทในการสร้างความคุ้มโรค
นักวิจัย : มัลลิกา ชมนาวัง(ไตรเดช)
คำค้น : a 39-kDa PlpB protein , Pasteurella multocida , role on the immunoprotective property , บทบาทในการสร้างความคุ้มโรค , เชื้อ Pasteurella multocida , โปรตีน PlpB 39-kDa
หน่วยงาน : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2553
อ้างอิง : http://elibrary.trf.or.th/project_content.asp?PJID=MRG5080114 , http://research.trf.or.th/node/2919
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

Pasteurella multocida เป็นเชื้อแบคทีเรียแกรมลบที่เป็นทราบกันว่าก่อให้เกิดการติดเชื้อทั้งใน สัตว์เลี้ยงในฟาร์มและสัตว์ป่า อัตราการเพิ่มขึ้นของการติดเชื้อนี้ที่พบว่าก่อให้เกิดโรคอหิวาต์และการติด เชื้อในกระแสเลือด กระตุ้นความสนใจในการศึกษาวิจัยเพื่อพัฒนาวัคซีนในการป้องกันโรคมากยิ่งขึ้น วัคซีนที่มีใช้ในปัจจุบันซึ่งมีทั้งแบบเชื้อตายและเชื้อเป็นก็มีข้อจำกัดในการใช้ มีการศึกษารายงานว่า P. multocida มีแอนติเจนที่สามารถกระตุ้นภูมิคุ้มกันที่ป้องกันการติดเชื้อระหว่างสายพันธุ์ได้ จากการ เปรียบเทียบลำดับนิวคลีโอไทด์ของฐานข้อมูล NCBI พบว่าแอนติเจนนี้มีความใกล้เคียงกับยีน plpB มาก ในงานวิจัยนี้ได้ทำการออกแบบ PCR primers ที่จำเพาะกับยีน plpB โดยอาศัยลำดับนิวคลีโอไทด์ ของ P. multocida Pm70 ซึ่งอยู่ในฐานข้อมูลสากล เพื่อนำมาเพิ่มปริมาณยีน plpB ของ P. multocida A:1 (FC-Pakchong) ซึ่งเป็นสายพันธุ์ที่พบในประเทศไทย จากการทดลองยังพบยีน plpB ใน P. multocida สายพันธุ์ NIAH DU1551/97 (A:1) และ NIAH D1275/27 (A:3,4) ซึ่งพบว่าเป็นสาเหตุให้ เกิดโรคอหิวาต์เป็ด-ไก่ในประเทศไทยด้วย ยีน plpB ประกอบไปด้วยนิวคลีโอไทด์ 831 คู่เบสถูกนำมา เชื่อมใส่ในพลาสมิด pGEX-5X-1 ซึ่งมียีนที่สร้างโปรตีน GST อยู่ จากนั้นนำไปตรวจสอบการสร้าง โปรตีน PlpB ใน E. coli โดยใช้ SDS-PAGE และทำการแยกโปรตีนนี้ด้วย affinity chromatography โดยใช้ glutathione พบว่า โปรตีน PlpB-GST มีขนาดตรงตามที่คาดไว้ คือ ประมาณ 63 กิโลดาลตัน ซึ่ง หลังจากตัดโดย Factor Xa จะได้โปรตีนขนาด 36 กิโลดาลตัน จากนั้นรีคอมไบแนนซ์โปรตีนดังกล่าวได้ ถูกนำไปทดสอบความเป็นพิษในหนูโดยทดสอบที่ความเข้มข้น 50, 100, 200 ไมโครกรัม ซึ่งไม่พบความ เป็นพิษใดแม้ใช้ในความเข้มข้นสูงถึง 200 ไมโครกรัม เมื่อทำการทดสอบความคุ้มโรคโดยการฉีดรีคอม ไบแนนซ์โปรตีน GST-PlpB ในหนูถีบจักร ก่อนจะฉีดเชื้อ P. multocida สายพันธุ์ A:1 ในขนาด 100 เท่า ของ LD50 พบว่าให้ความคุ้มโรคร้อยละ 20 เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุมที่ไม่ได้รับวัคซีน ส่วนเชื้อ P. multocida สายพันธุ์ A:3,4 พบว่าให้ความคุ้มโรคร้อยละ 0-30 จากผลการศึกษานี้ แสดงให้เห็นว่า โปรตีน PlpB นี้อาจไม่ใช้เป้าหมายที่เหมาะสมหากต้องการพัฒนาวัคซีนแบบหน่วยย่อยสำหรับป้องกัน การติดเชื้อนี้ Pasteurella multocida is a gram-negative bacterial pathogen known to affect a wide range of domestic and wild animals. The increasing incidence of P. multocida isolated from cases of fowl cholera and hemorrhagic septicemia in most parts of the world has led to a renewed interest in this pathogen as well as in the development of vaccines. The currently available vaccines, bacterins and modified live vaccines, have limited efficacy. P. multocida has been demonstrated to express an antigen that induces cross protection against different serotypes. The purified cross-protective antigen of P. multocida was consistent with the plpB gene listed in the National Center for Biotechnology Information database for P. multocida. In this study, the PCR primers were designed based on the nucleotide sequence of P. multocida, Pm70 which was already published and used to amplify the fragment of plpB gene from P. multocida A:1 (FC-Pakchong). The plpB gene could also be detected in P. multocida NIAH DU1551/97 (A:1) and P. multocida NIAH D1275/27 (A:3,4); that were most associated with fowl cholera. The plpB gene, consisting of 831 base pairs was cloned and expressed. The purified PCR product was inserted into the pGEX-5X-1 plasmid which was carrying a gene encoding for GST protein. The expression of recombinant GST-tagged PlpB fusion protein in Escherichia coli was detected by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and purified by immobilized glutathione affinity column chromatography. The purified recombinant GST-PlpB fusion protein showed a major band migrated at about 63 kDa on SDS-PAGE gel which was an approximate size of the fusion protein. (After cleavage by factor Xa, GST tag was cleaved. The separated protein was presented at about 36 kDa.) Three concentrations of recombinant GST-PlpB fusion protein (50, 100, and 200 ?g) were tested for the toxicity in mice. The results showed no toxicity in mice at the highest tested concentration (200 ?g) of the protein. Moreover, the immunoprotective property of the recombinant GST-PlpB protein was determined in mice after subcutaneous immunization and challenge with an approximate dose of 100 LD50 of P. multocida serotype A:1. It was demonstrated that this subunit vaccine provided a 20% survival rate whereas all of the nonimmunized mice died from P. multocida infection. Additionally, the survival rate was about 0-30% for P. multocida serotype A:3,4. In conclusion, our data indicated that the PlpB protein may not be an appropriate target as a candidate subunit vaccine for P. multocida infection.

บรรณานุกรม :
มัลลิกา ชมนาวัง(ไตรเดช) . (2553). การศึกษาโปรตีน PlpB 39-kDa จากเชื้อ Pasteurella multocida และบทบาทในการสร้างความคุ้มโรค.
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
มัลลิกา ชมนาวัง(ไตรเดช) . 2553. "การศึกษาโปรตีน PlpB 39-kDa จากเชื้อ Pasteurella multocida และบทบาทในการสร้างความคุ้มโรค".
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
มัลลิกา ชมนาวัง(ไตรเดช) . "การศึกษาโปรตีน PlpB 39-kDa จากเชื้อ Pasteurella multocida และบทบาทในการสร้างความคุ้มโรค."
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย, 2553. Print.
มัลลิกา ชมนาวัง(ไตรเดช) . การศึกษาโปรตีน PlpB 39-kDa จากเชื้อ Pasteurella multocida และบทบาทในการสร้างความคุ้มโรค. กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย; 2553.