ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การโคลนและการแสดงออกของยีน aminopeptidase N จากเซลล์กระเพาะลูกน้ำยุง Aedes aegypti

หน่วยงาน สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การโคลนและการแสดงออกของยีน aminopeptidase N จากเซลล์กระเพาะลูกน้ำยุง Aedes aegypti
นักวิจัย : กุศล ภูธนกิจ
คำค้น : Aedes aegypti , Aminopeptidase N , Bacillus thuringiensis , Cry toxin , larval midgut
หน่วยงาน : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2546
อ้างอิง : http://elibrary.trf.or.th/project_content.asp?PJID=PDF4380056 , http://research.trf.or.th/node/669
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

วัตถุประสงค์ : เพื่อศึกษาว่ามียีนที่สร้าง aminopeptidase N ( APN ) ในกระเพาะลูกน้ำยุงลาย ( Aedes aegypti ) หรือไม่ วิธีการทดลอง : เนื่องจากขณะที่เริ่มโครงการวิจัยนี้ยังไม่มีการค้นพบ APN ในลูกน้ำยุงลาย ดังนั้นจึงต้องใช้ degenerate primer เพื่อเพิ่มจำนวน APN จาก RNA( RT-PCR ) เพื่อทดสอบว่ามีการสร้าง APN ในกระเพาะลูกน้ำยุงลายหรือไม่ ผลกาทดลอง : หลังจากสกัดแยก total RAN จากกระเพาะลูกน้ำยุงลายระยะสุดท้าย ( Aedes aegypti fourth instar larvae ) ได้นำ RNA นี้ไปใช้เป็นต้นแบบ ( template ) สำหรับ RT-PCR โดยใช้ degenerate primer ซึ่งออกแบบจากส่วนของลำดับกระอะมิโนของ APN ที่มีความเหมือนกันในแมลงต่างๆ ที่มีการรายงานไว้ ผลิตภัณฑ์ที่ได้มีขนาด 550 bp ดังที่คาดไว้และเมื่อนำผลิตภัณฑ์นี้มาแยกให้บริสุทธิ์โดยใช้วิธี gel purification ผลิตภัณฑ์ DNA ที่แยกได้ถูกนำไปหาลำดับเบสซึ่งผลที่ได้แสดงว่า ผลิตภัณฑ์ DNA นี้คือ APN เนื่องจากมีความคล้ายคลึง ( 30% ) กับ APN ของแมลงอื่นๆ และมีรายงานว่า APN จากกระเพาะแมลงอื่นๆ นั้นมีหลายรูปแบบ ดังนั้นเราจึงมุ่งความสนใจไปที่การศึกษาว่า APN จากกระเพาะลูกน้ำยุงลายมีหลายรูปแบบด้วยหรือไม่ RT-PCR ที่ใช้ primer อย่างจำเพาะต่อ APN ของยุงลายที่โตเต็มที่จะให้ลายของ DNA ขนาด 2.9 kb การวิเคราะห์ลำดับเบสบางส่วนของสาย DNA นี้ แสดงว่าสาย DNA นี้คือ APN ของ Ae. Aegypti ที่มีการรายงานไว้ สรุปและวิจารณ์ผลการทดลอง : โดยการใช้วิธี RT-PCR เราสามารถจำแนกยีนที่สร้าง APN ซึ่งสกัดได้จากกระเพาะลูกน้ำยุงลายได้ 2 รูปแบบ ผลที่ได้นี้สนับสนุนผลที่ได้จากการศึกษาในตัวอ่อนของแมลงในกลุ่ม lepidopteran ที่แสดงว่า APN มีหลายรูปแบบเช่นกัน ข้อเสนอแนะสำหรับงานวิจัยในอนาคต : ในขั้นต่อไปควรศึกษาว่ารูปแบบใดของ APN มีความเกี่ยวข้องกับการฆ่าลูกน้ำยุง Objective : To determine if aminopeptidase N ( APN ) transcript is present in the gut cells of Aedes aegypti larvae. Methods : Since APN from Aedes aegypti larva has not been determined when this project was initiated , reverse transcriptase-polymerase chain reaction ( RT-PCR ) using degenerate oligonucleotide primers was employed to determine if the midgut larval of Aedes aegypti expresses APN. Results : Total RNA was isolated from microdissected midgut of Aedes aegypti fourth instar larvae. RT-PCR reaction using degenerate primers corresponding to the highly conserved amino acid sequence across other published insects’ APNs , revealed a robust PCR product ( ~ 550 bp ) of the expected size. Subsequent sequencing of this gel-purfied PCR product and sequence analysis demonstrated that it is indeed belonged to APN , having a low sequence homology ( ~ 30% ) to other insects. Since various reports suggested that numerous isoforms of APNs exists in insect larvae midgut , we shifted our attention to determine if this is also true for Ae.aegypti larvae. RT-PCR reaction using specific primers based on one of the adult Ae.aegypti APN sequences gave a 2.9 kb product. Partial sequencing confirmed that this band indeed corresponded to the published Ae.aegypti APNs. Conclusion : Using RT-PCR , we have identified two isoforms of Apn transcripts in the Ae.aegypti mosquito larval midgut. These results are congruent with the previous report of multiple isoforms of APN gene expression in lepidopteran larvae. Suggestions : More works remain to be done to determine which of the two isoforms ( or other yet identified receptor proteins ) is involved in the killing of mosquito larvae.

บรรณานุกรม :
กุศล ภูธนกิจ . (2546). การโคลนและการแสดงออกของยีน aminopeptidase N จากเซลล์กระเพาะลูกน้ำยุง Aedes aegypti.
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
กุศล ภูธนกิจ . 2546. "การโคลนและการแสดงออกของยีน aminopeptidase N จากเซลล์กระเพาะลูกน้ำยุง Aedes aegypti".
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
กุศล ภูธนกิจ . "การโคลนและการแสดงออกของยีน aminopeptidase N จากเซลล์กระเพาะลูกน้ำยุง Aedes aegypti."
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย, 2546. Print.
กุศล ภูธนกิจ . การโคลนและการแสดงออกของยีน aminopeptidase N จากเซลล์กระเพาะลูกน้ำยุง Aedes aegypti. กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย; 2546.