ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

Protein engineering of the 4-methyl-5-nitrocatechol monooxygenase from Burkholderia sp. strain DNT for enhanced degradation of nitroaromatics

หน่วยงาน สถาบันวิจัยและให้คำปรึกษาแห่ง มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : Protein engineering of the 4-methyl-5-nitrocatechol monooxygenase from Burkholderia sp. strain DNT for enhanced degradation of nitroaromatics
นักวิจัย : Thammajun Leungsakul , Johnson, Glenn R. , Wood, Thomas K.
คำค้น : -
หน่วยงาน : สถาบันวิจัยและให้คำปรึกษาแห่ง มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2549
อ้างอิง : Applied and environmental microbiology. 72,6 (2006) pp. 3933-3939 , http://dspace.library.tu.ac.th/handle/3517/1160
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

4-Methyl-5-nitrocatechol (4M5NC) monooxygenase (DntB) from Burkholderia sp. strain DNT catalyzes the second step of 2,4-dinitrotoluene degradation by converting 4M5NC to 2-hydroxy-5-methylquinone with the concomitant removal of the nitro group. DntB is a flavoprotein that has a very narrow substrate range. Here, error-prone PCR was used to create variant DntB M22L/L380I, which accepts the two new substrates 4-nitrophenol (4NP) and 3-methyl-4-nitrophenol (3M4NP). At 300 μM of 4NP, the initial rate of the variant expressing M22L/L380I enzyme (39 ± 6 nmol/min/mg protein) was 10-fold higher than that of the wild-type enzyme (4 ± 2 nmol/min/mg protein). The values of k cat/Km of the purified wild-type DntB enzyme and purified variant M22L/L380I were 40 and 450 (s-1 M-1), respectively, which corroborates that the variant M22L/L380I enzyme has 11-fold-higher efficiency than the wild-type enzyme for 4NP degradation. In addition, the variant M22L/L380I enzyme has fourfold-higher activity toward 3M4NP; at 300 μM, the initial nitrite release rate of M22L/L380I enzyme was 17 ± 4 nmol/min/mg protein, while that of the wild-type enzyme was 4.4 ± 0.7 nmol/min/mg protein. Saturation mutagenesis was also used to further investigate the role of the individual amino acid residues at positions M22, L380, and M22/L380 simultaneously. Mutagenesis at the individual positions M22L and L380I did not show appreciable enhancement in 4NP activity, which suggested that these two sites should be mutated together; simultaneous saturation mutagenesis led to the identification of the variant M22S/L380V, with 20% enhanced degradation of 4NP compared to the variant M22L/L380I. This is the first report of protein engineering for nitrite removal by a flavoprotein.

บรรณานุกรม :
Thammajun Leungsakul , Johnson, Glenn R. , Wood, Thomas K. . (2549). Protein engineering of the 4-methyl-5-nitrocatechol monooxygenase from Burkholderia sp. strain DNT for enhanced degradation of nitroaromatics.
    กรุงเทพมหานคร : สถาบันวิจัยและให้คำปรึกษาแห่ง มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์ .
Thammajun Leungsakul , Johnson, Glenn R. , Wood, Thomas K. . 2549. "Protein engineering of the 4-methyl-5-nitrocatechol monooxygenase from Burkholderia sp. strain DNT for enhanced degradation of nitroaromatics".
    กรุงเทพมหานคร : สถาบันวิจัยและให้คำปรึกษาแห่ง มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์ .
Thammajun Leungsakul , Johnson, Glenn R. , Wood, Thomas K. . "Protein engineering of the 4-methyl-5-nitrocatechol monooxygenase from Burkholderia sp. strain DNT for enhanced degradation of nitroaromatics."
    กรุงเทพมหานคร : สถาบันวิจัยและให้คำปรึกษาแห่ง มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์ , 2549. Print.
Thammajun Leungsakul , Johnson, Glenn R. , Wood, Thomas K. . Protein engineering of the 4-methyl-5-nitrocatechol monooxygenase from Burkholderia sp. strain DNT for enhanced degradation of nitroaromatics. กรุงเทพมหานคร : สถาบันวิจัยและให้คำปรึกษาแห่ง มหาวิทยาลัยธรรมศาสตร์ ; 2549.