ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การทรานส์ฟอร์มรีพอร์เทอร์ยีนที่สร้างโปรตีนกรีนฟลูออเรสเซนต์เข้าสู่ข้าวพันธุ์ขาวดอกมะลิ 105 ~iOryza sativa~i cv. KDML 105 โดยเลี้ยงร่วมกับ อะโกรแบคทีเรียม

หน่วยงาน ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การทรานส์ฟอร์มรีพอร์เทอร์ยีนที่สร้างโปรตีนกรีนฟลูออเรสเซนต์เข้าสู่ข้าวพันธุ์ขาวดอกมะลิ 105 ~iOryza sativa~i cv. KDML 105 โดยเลี้ยงร่วมกับ อะโกรแบคทีเรียม
นักวิจัย : จันทร์ประภา อิ่มจงใจรัก
คำค้น : AGROBACTERIUM , TRANSFORMATION , RICE , KDML 105 , GFP , REPORTER GENE , CO-CULTIVATION
หน่วยงาน : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2543
อ้างอิง : http://www.thaithesis.org/detail.php?id=1082543000380
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

การทรานส์ฟอร์มรีพอร์เทอร์ยีนที่สร้างโปรตีนกรีนฟลูออเรสเซนต์ (GFP) เข้าสู่ข้าวพันธุ์ขาวดอกมะลิ 105 ทำได้โดยการเลี้ยงเอมบริโอเจนิคแคลลัส ที่ได้จากสคิวเทลลัมของเอมบริโอร่วมกับอะโกรแบคทีเรียม สายพันธุ์ ~iAgrobacterium tumefaciens~i EHA 105 ซึ่งมีpCAMBIA1301 (มียีนต้านยาไฮโกรไมซิน ~i(hpt)~i เป็นยีนเครื่องหมาย และมีรีพอร์เทอร์ยีนคือ ยีนที่สร้าง GUS ~i(uidA~i gene)) pCAMBIA5305 (มียีน ~ihpt~i เป็นยีนเครื่องหมาย และมีรีพอร์เทอร์ยีนคือยีนที่สร้างโปรตีนกรีนฟลูออเรสเซนต์ (GFP) และpCAMBIA1306IC (มียีน ~-hpt~i เป็นยีนเครื่องหมาย และมียีนที่สร้าง GUS และ GFPเป็นรีพอร์เทอร์ยีน) โดยยีนเหล่านี้ถูกควบคุมด้วยโปรโมเตอร์ CaMV35S จากการทดลองชักนำเมล็ดข้าวขาวดอกมะลิ 105 ให้เกิดเอมบริโอเจนิคแคลลัสบนอาหาร 2 สูตร คือ 2MS และ 2NB พบว่าสูตร 2NB สามารถชักนำให้เกิดเอมบริโอเจนิคแคลลัสได้ 79.2 (+,ฑ)3.4% ในขณะที่ 2MS ชักนำให้เกิดได้ 54.6(+,ฑ)2.5%เมื่อนำแคลลัสที่ได้มาทำให้เกิดเป็นต้นโดยเปรียบเทียบอาหาร 4 สูตร คือ MS1-RENB1-RE NB2-RE และ NB4-RE พบว่าอาหารสูตร NB4-RE สามารถชักนำให้เกิดยอดได้ดีที่สุด คือ 68.2(+,ฑ)13.6% ในการทรานสฟอร์มโดยใช้อะโกรแบคทีเรียมเริ่มแรกได้นำอะโกรแบคทีเรียมที่มี pCAMBIA1301มาเลี้ยงร่วมกับเอมบริโอเจนิคแคลลัสเป็นเวลา 3 วัน และตรวจสอบการทรานส์ฟอร์มโดยการแสดงออกของรีพอร์เทอร์ยีนที่สร้าง GUS พบว่ามีเปอร์เซนต์การทรานส์ฟอร์ม 15.8% และหลังจากเลี้ยงร่วมกันเป็นเวลา 3 วันแล้ว ได้นำแคลลัสลงเลี้ยงในอาหารที่มีไฮโกรไมซิน (50 mg/I)พบว่ามีแคลลัสที่สามารถต้านทานไฮโกรไมซินเกิดขึ้นหลังจาก 4 สัปดาห์ แคลลัสที่ไม่ได้เลี้ยงร่วมกับอะโกรแบคทีเรียมไม่สามารถเจริญได้ในอาหารที่มีไฮโกรไมซินหลังจาก 8 สัปดาห์พบว่าเปอร์เซนต์การทรานส์ฟอร์มของแคลลัสที่สามารถเจริญได้ในไฮโกรไมซิน และมีการแสดงออกของรีพอร์เทอร์ยีนที่สร้าง GUS คือ 19.4%ในการทรานส์ฟอร์มรีพอร์เทอร์ยีนที่สร้าง GFP เข้าสู่ข้าวสามารถทำได้โดยใช้อะโกรแบคทีเรียมที่มี pCAMBIA5305 และ pCAMBIA1306IC มาเลี้ยงร่วมกับเอมบริโอเจนิคแคลลัสเป็นเวลา 3 วัน เช่นเดียวกัน แคลลัสที่ได้รับการทรานส์ฟอร์มรีพอร์เทอร์ยีนที่สร้าง GFP จะถูกชักนำให้เกิดเป็นต้นใหม่ การตรวจสอบการทรานส์ฟอร์มรีพอร์เทอร์ยีนที่สร้าง GFP เข้าสู่ข้าว ทำได้โดยตรวจการเรืองแสงของ GFP ในต้นข้าวและตรวจสอบยีนของ GFP ด้วยเทคนิคพีซีอาร์ พบว่าสามารถตรวจผลิตผลพีซีอาร์ได้ในทุกต้นของข้าวที่มีการเรืองแสงของ GFP และพบว่าประสิทธิภาพของการทรานส์ฟอร์มของอะโกรแบคทีเรียม เข้าสู่ต้นข้าวที่มีการแสดงออกของ GFP ที่ได้จากการทรานส์ฟอร์มด้วย pCAMBIA5305 และมีทั้งการแสดงออกของ GFP และการแสดงออกของรีพอร์เทอร์ยีนที่สร้าง GUSที่ได้จากการทรานส์ฟอร์มด้วย pCAMBIA1306IC มีค่า 9.8% และ 8.2%ตามลำดับ

บรรณานุกรม :
จันทร์ประภา อิ่มจงใจรัก . (2543). การทรานส์ฟอร์มรีพอร์เทอร์ยีนที่สร้างโปรตีนกรีนฟลูออเรสเซนต์เข้าสู่ข้าวพันธุ์ขาวดอกมะลิ 105 ~iOryza sativa~i cv. KDML 105 โดยเลี้ยงร่วมกับ อะโกรแบคทีเรียม.
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย.
จันทร์ประภา อิ่มจงใจรัก . 2543. "การทรานส์ฟอร์มรีพอร์เทอร์ยีนที่สร้างโปรตีนกรีนฟลูออเรสเซนต์เข้าสู่ข้าวพันธุ์ขาวดอกมะลิ 105 ~iOryza sativa~i cv. KDML 105 โดยเลี้ยงร่วมกับ อะโกรแบคทีเรียม".
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย.
จันทร์ประภา อิ่มจงใจรัก . "การทรานส์ฟอร์มรีพอร์เทอร์ยีนที่สร้างโปรตีนกรีนฟลูออเรสเซนต์เข้าสู่ข้าวพันธุ์ขาวดอกมะลิ 105 ~iOryza sativa~i cv. KDML 105 โดยเลี้ยงร่วมกับ อะโกรแบคทีเรียม."
    กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย, 2543. Print.
จันทร์ประภา อิ่มจงใจรัก . การทรานส์ฟอร์มรีพอร์เทอร์ยีนที่สร้างโปรตีนกรีนฟลูออเรสเซนต์เข้าสู่ข้าวพันธุ์ขาวดอกมะลิ 105 ~iOryza sativa~i cv. KDML 105 โดยเลี้ยงร่วมกับ อะโกรแบคทีเรียม. กรุงเทพมหานคร : ฐานข้อมูลวิทยานิพนธ์ไทย; 2543.