ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การศึกษาหายีนของพยาธิตัวจิ๊ดที่ผลิตแอนติเจนที่มีความสำคัญในการวินิจฉัยโรค

หน่วยงาน สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การศึกษาหายีนของพยาธิตัวจิ๊ดที่ผลิตแอนติเจนที่มีความสำคัญในการวินิจฉัยโรค
นักวิจัย : พิชาติ อุปรานุเคราะห์
คำค้น : 24-kDa protein , advanced third-stage larva , cDNA library , fusion protein , Gnathostoma spinigerum , mAb GN6/24 , matrix metalloproteinase
หน่วยงาน : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2544
อ้างอิง : http://elibrary.trf.or.th/project_content.asp?PJID=BRG4080008 , http://research.trf.or.th/node/257
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
คำอธิบาย :

การศึกษาแอนติเจนของตัวอ่อน (advanced third-stage larva, aL3) ของพยาธิตัวจี๊ดที่ติด ฉลากด้วย 35S พบว่าโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อโปรตีนขนาด 24 กิโลดัลตัน (mAb GN6/24) ทำ ปฏิกิริยากับส่วนที่เป็นเป็บไทด์ของโปรตีน และยังพบว่า โปรตีนขนาด 24 กิโลดัลตันนี้เป็น N- linked glycoprotein ซีรั่มของผู้ป่วยโรคพยาธิตัวจี๊ดทำปฏิกิริยากับส่วนใหญ่ของโปรตีนของตัว อ่อนพยาธิและโปรตีนขนาด 24 กิโลดัลตันที่ถูกย่อยเอาคาร์โบไฮเดรตออก แสดงว่าน่าจะนำโมโน โคลนอลแอนติบอดีและซีรั่มของผู้ป่วยโรคพยาธิตัวจี๊ดไปใช้ในการตรวจกรอง (screening) cDNA library ได้ cDNA library ของตัวอ่อนพยาธิตัวจี๊ดได้ถูกสร้างขึ้นมาโดยใช้ lambda ZAP vector การตรวจกรอง cDNA library ด้วย mAb GN6/24 พบว่ามีโคลนที่มีขนาดของ cDNA insert เท่ากับ 932 เบส และโคลนนี้มียีนที่เรียกชื่อว่า Gs24 ที่มีความคล้ายคลึงกับ matrix metalloproteinases ของสัตว์ชั้นสูงหลายชนิด พบว่าใน somatic และ excretory-secretory proteins ของตัวอ่อนพยาธิ มี protease activity อันหนึ่งที่มีขนาดเท่ากับโปรตีนที่ทำปฏิกิริยากับ mAb GN6/24 เมื่อนำยีน Gs24 นี้ไปแสดงออก (express) ใน pMAL-c2X พบว่า fusion protein ที่ผลิตโดยแบคทีเรียเป็น โปรตีนที่ไม่ละลายในน้ำ และเมื่อทำให้โปรตีนนี้ละลายน้ำ กลับสู่สภาพธรรมชาติ (renaturation) และทำให้บริสุทธิ์ พบว่าได้โปรตีนที่บริสุทธิ์ในปริมาณที่ต่ำมาก การทดสอบโปรตีนที่บริสุทธิ์นี้โดย วิธีอีไลซ่า พบว่าไม่สามารถแยกผู้ป่วยโรคพยาธิตัวจี๊ดออกจากโรค angiostrongyliasis และคนปกติ ได้ การตรวจกรอง library ด้วยซีรั่มของผู้ป่วยโรคพยาธิตัวจี๊ด ทำให้พบยีนสองชนิดที่มีความ คล้ายคลึงกับ serine protease inhibitor และ apyrase The study on the recognition of deglycosylated 35S-labeled somatic antigens of Gnathostoma spinigerum advanced third-stage larva (aL3) has revealed that the mAb GN6/24 reacts with the peptide epitope on the 24-kDa protein. The data have also shown that the 24-kDa protein is an N-linked glycoprotein. Human gnathostomiasis antiserum reacts with most deglycosylated larval proteins including the deglycosylated 24-kDa protein. The results imply that these antibodies should be useful for immunoscreening of the cDNA library. The PCR-based and conventional methods were successfully applied to construct cDNA libraries of G. spinigerum aL3 in lambda ZAP vector. Screening of the cDNA library constructed by conventional method by the monoclonal antibody to the 24-kDa protein (mAb GN6/24) has identified a clone with an insert of 932 basepairs (bp). The cDNA insert contains a gene designated Gs24 encoding a protein similar to matrix metalloproteinases of several eukaryotes. One of the protease activities present in somatic and excretory- secretory (ES) of aL3 co-migrates with the 24-kDa protein recognized by the mAb GN6/24. Cloning of the Gs24 gene into the expression vector pMAL-c2X has resulted in the expression of insoluble fusion protein. Purification of the fusion protein after solubilization and renaturation has given a very low yield of the purified protein. Evaluation of the purified fusion protein by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) has shown that the assay could not differentiate gnathostomiasis from angiostrongyliasis and normal individuals. Screening of the library by gnathostomiasis sera has also identified two genes similar to serine protease inhibitor and apyrase.

บรรณานุกรม :
พิชาติ อุปรานุเคราะห์ . (2544). การศึกษาหายีนของพยาธิตัวจิ๊ดที่ผลิตแอนติเจนที่มีความสำคัญในการวินิจฉัยโรค.
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
พิชาติ อุปรานุเคราะห์ . 2544. "การศึกษาหายีนของพยาธิตัวจิ๊ดที่ผลิตแอนติเจนที่มีความสำคัญในการวินิจฉัยโรค".
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
พิชาติ อุปรานุเคราะห์ . "การศึกษาหายีนของพยาธิตัวจิ๊ดที่ผลิตแอนติเจนที่มีความสำคัญในการวินิจฉัยโรค."
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย, 2544. Print.
พิชาติ อุปรานุเคราะห์ . การศึกษาหายีนของพยาธิตัวจิ๊ดที่ผลิตแอนติเจนที่มีความสำคัญในการวินิจฉัยโรค. กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย; 2544.