ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การศึกษาหน้าที่และโครงสร้างของเอนไซม์ Glutathione S-Transferase (GSTs)

หน่วยงาน สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การศึกษาหน้าที่และโครงสร้างของเอนไซม์ Glutathione S-Transferase (GSTs)
นักวิจัย : Albert Ketterman
คำค้น : Glutathione transferase , kinetic parameters , molecular dynamics simulation , Site-directed mutagenesis , stabilit , กลูตาไธโอนเอสทรานสเฟอเรส , การเปลี่ยนกรดอะมิโนเฉพาะที่ , คุณสมบัติทางจลน์ศาสตร์ , เสถียรภาพต่อคว , แบบจำลองโครงสร้างเคลื่อนไหว
หน่วยงาน : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2546
อ้างอิง : http://elibrary.trf.or.th/project_content.asp?PJID=BGJ4580018 , http://research.trf.or.th/node/212
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

ได้ทำการศึกษาคุณสมบัติด้านจลน์ศาสตร์และบทบาทด้านโครงสร้างของเอนไซม์ AdGSTD3-3 จากยุง An. dirus โดยทำการเปลี่ยนกรดอะมิโนเฉพาะที่บริเวณตำแหน่ง Cys69 เป็นกรดอะมิโนชนิดต่างๆรวม 9 ชนิดประกอบด้วยกลุ่มโพลาร์ กลุ่มที่ไม่โพลาร์ และกลุ่มที่ แขนงข้างสามารถแตกตัวได้ ด้วยวิธีการเพิ่มขยาย DNA จากนั้นเอนไซม์กลายพันธ์ ทุกตัวได้ ถูกทำให้บริสุทธิ์โดยการใช้ affinity column จากนั้นได้ศึกษาคุณลักษณะของเอนไซม์ และได้สร้างแบบจำลองโครงสร้างเคลื่อนไหวเพื่อให้เข้าใจถึงการเปลี่ยนแปลงภายในโครงสร้าง ของเอนไซม์ชึ่งพบว่ากรดอะมิโนกลุ่มโพลาร์มีผลต่ออัตราความเร็วสูงสุดของเอนไซม์ กรด อะมิโนกลุ่มที่ไม่โพลาร์ ทำให้เอนไซม์ละลายน้ำลดลงและตกตะกอนส่วนกลุ่มอะมิโนที่แขนง ข้างสามารถแตกตัวได้ทำให้ปริมาณผลิตของเอนไซม์ลดลงคิดเป็น3% ของเอนไซม์ตั้งต้น เอนไซม์กลายพันธุ์ทุกตัว มีเสถียรภาพต่อความร้อนต่ำกว่าเอนไซม์ตั้งต้น ดังนั้นกรดอะมิโน ตำแหน่ง 69 อาจจะมีบทบาท ในการม้วนหรือพับตัว และมีผลต่อเสถียรภาพของเอนไซม์ ส่วนการศึกษาแบบจำลองเคลื่อนไหวของเอนไซม์กลายพันธุ์Cys69 พบว่าเอนไซม์กลายพันธ์ มีโครงรูปต่างจากเอนไซม์ต้นแบบโดยมีตำแหน่งของจุดศูนย์ถ่วง(Cg)ต่างกัน การศึกษาทั้งหมด ได้แสดงให้เห็นถึง บทบาทของกรดอะมิโนสำคัญ ที่ตำแหน่งนอกบริเวณเร่งของเอนไซม์ที่ มีผลต่อคุณสมบัติ ด้านจลน์ศาสตร์เช่นค่าอัตราความเร็วสูงสุด ค่าคงที่ของมิเคลิส และ ความ จำเพาะของเอนไซม์ นอกจากนี้ยังเป็นข้อมูลในการระบุตำแหน่ง และลักษณะ ของบริเวณ โครงสร้าง ที่สำคัญในเอนไซม์GST ที่พบในแมลงซึ่งอาจเป็นประโยชน์ในการ ศึกษาสารยับยั้งที่ จำเพาะ เพื่อใช้ในการควบคุมโรคมาเลเรียต่อไป The Cys69 residue of an Anopheles dirus glutathione S-transferase isoform (GSTD3-3), was characterized to elucidate its contribution in both catalysis and structural support. Nine mutants were generated at this position by replacing the residue with polar, non-polar and charged residues using PCR-based site-directed mutagenesis. All the mutants enzymes were then purified by affinity chromatography and characterized using several kinetic parameters. Molecular dynamics simulations were also performed to understand all the changes in the enzyme structure. The polar residues changed the Vm of the enzymes. With non-polar residues, the enzymes were unable to fold and were expressed in the insoluble inclusion form. With charged residues, the soluble enzyme yields were only 3% of the wild type protein. All Cys69 mutants have dramatically decreased half-lives. therefore residue 69 may be involved in the initial enzyme folding as well as stability. Molecular dynamics simulation also showed that the location of Cys69 mutants relative to the center of gravity of the protein is different for the wild type indicating a different conformation.These findings are additional evidence of the importance of structural residues that affect the enzymatic properties such as Vm, Km and enzyme specificity. The information will contribute to identifying the location and nature of important structural regions in insect delta class GSTs that affect enzyme activity and may be useful in identifying selective inhibitors for use in improving the malaria-control strategies.

บรรณานุกรม :
Albert Ketterman . (2546). การศึกษาหน้าที่และโครงสร้างของเอนไซม์ Glutathione S-Transferase (GSTs).
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
Albert Ketterman . 2546. "การศึกษาหน้าที่และโครงสร้างของเอนไซม์ Glutathione S-Transferase (GSTs)".
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
Albert Ketterman . "การศึกษาหน้าที่และโครงสร้างของเอนไซม์ Glutathione S-Transferase (GSTs)."
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย, 2546. Print.
Albert Ketterman . การศึกษาหน้าที่และโครงสร้างของเอนไซม์ Glutathione S-Transferase (GSTs). กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย; 2546.