ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การพัฒนาวิธีตรวจวัด แอล-กลูตาเมต แบบใหม่ โดยใช้หลักการปฏิกิริยาหมุนเวียน

หน่วยงาน สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การพัฒนาวิธีตรวจวัด แอล-กลูตาเมต แบบใหม่ โดยใช้หลักการปฏิกิริยาหมุนเวียน
นักวิจัย : วิทยา มีวุฒิสม
คำค้น : D-phenylglycine aminotransferase , enzymatic cycling , flow injection analysis , L-glutamate , กลูตาเมต , การวิเคราะห์ด้วยระบบโฟลอินเจคชั่น , ดี-ฟินิลกลัยซีน อะมิโนทรานสเฟอ-เรส , ปฏิกิริยาหมุนเวียนของสับสเตรท
หน่วยงาน : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2547
อ้างอิง : http://elibrary.trf.or.th/project_content.asp?PJID=BGJ4580016 , http://research.trf.or.th/node/210
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

ได้พัฒนาระบบโฟลอินเจคชั่น (Flow injection analysis) ที่มีความจำเพาะสูงสำหรับการตรวจวัดปริมาณกลูตาเมตในอาหาร ปริมาณกลูตาเมตในตัวอย่างจะถูกเพิ่มจำนวน โดยปฏิกิริยาการหมุนเวียนระหว่างเอนไซม์สองชนิด คือ แอล-กลูตาเมต ดีไฮโดรจีเนส (L-glutamate dehydrogenase, GlDH) และ เอนไซม์ที่ถูกค้นพบใหม่ ชื่อ ดี-ฟีนิลกลัยซีน อะมิโนทรานสเฟอเรส (D-phenylglycine aminotransferase, D-PhgAT) ในระบบการวิเคราะห์นี้ เอนไซม์ GlDH จะทำหน้าที่เปลี่ยน กลูตาเมต เป็นคีโตกลูทาเรต ซึ่งเหตุการณ์นี้ได้เกิดขึ้นพร้อมกับการเพิ่มไฮโดรเจนแก่สาร NAD+ ทำให้เกิดสาร NADH ขึ้นในปฏิกิริยา ส่วนเอนไซม์ D-PhgAT ทำหน้าที่ย้ายหมู่ อะมิโน จากสาร D-4-hydroxyphenylglycine ไปสู่สารคีโตกลูทาเรต และด้วยปฏิกิริยานี้ ทำให้เกิด กลูตาเมตขึ้นใหม่ การสะสมของสาร NADH ในปฏิกิริยา จะถูกติดตามด้วยคุณสมบัติในการเรืองแสง และคุณสมบัติการดูดกลืนแสง ในช่วงความยาวคลื่นอุลตราไวโอเลต (340 nm) และมีความสัมพันธ์กับปริมาณกลูตาเมตตั้งต้น ด้วยวิธีการนี้ พบว่าสามารถทำการวิเคราะห์ในระยะยาวได้อย่างน้อย 70 วัน และมีค่า Reproducibility Standard Deviation (RSD) เมื่อทำการวิเคราะห์ภายใน และระหว่างวัน เป็น 4.3-7.3% and 8.9% ตามลำดับ วิธีการตรวจวัดที่ใช้คุณสมบัติในการเรืองแสง มีความไวมากกว่าวิธีการตรวจวัดด้วยการดูดกลืนแสงช่วงยูวี เล็กน้อย โดยสามารถทำการตรวจวัดความเข้มข้นต่ำสุดของกลูตาเมต ที่ 0.4 ?M และช่วงความเข้มข้นของกลูตาเมตที่ให้ความสัมพันธ์เป็นเส้นตรงคือ 2.5-50 ?M ด้วยวิธีการนี้มีความจำเพาะสูงต่อแอล-กลูตาเมตเท่านั้น เมื่อทดสอบกับกรดอะมิโน ชนิดแอล ตัวอื่น ๆ ทั้ง 17 ชนิด พบว่ามีค่า recoveries อยู่ในช่วง 95-103% นอกจากนี้ เมื่อทำการตรวจวัดปริมาณกลูตาเมตในตัวอย่างอาหารจริง พบว่าวิธีนี้ให้ผลการวิเคราะห์ที่ใกล้เคียงกับวิธีการตรวจวัดที่เป็นชุดตรวจสอบสำเร็จรูปของบริษัท Boehringer Mannheim A flow injection analysis (FIA) system for specific determination of L-glutamate in food samples based on a bi-enzymatic amplification system has been developed. The content of L-glutamate in the sample was amplified by cycling between L-glutamate dehydrogenase (GlDH) and a novel enzyme, D-phenylglycine aminotransferase (D-PhgAT). In this system, GlDH converts L-glutamate to 2-oxoglutarate with concomitant reduction of NAD+ to NADH. D-PhgAT transfers an amino group from D-4-hydroxyphenylglycine to 2-oxoglutarate, thus recycling L-glutamate. Accumulation of NADH in the course of the enzymatic recycling was monitored both by fluorescence and UV absorbance and used for quantification of L-glutamate. The assay was characterized by high long-term stability (at least 70 days) and good reproducibility (within-day and between-day RSDs were 4.3-7.3% and 8.9%). The fluorimetric assay was slightly more sensitive with a L-glutamate detection limit of 0.4 ?M and linear range of 2.5-50 ?M. The assay was specific for L-glutamate, with recoveries between 95-103% in the presence of 17 different amino acids tested one by one. The method was applied to analysis of real food samples and results were correlated with a commercial Boehringer Mannheim assay kit.

บรรณานุกรม :
วิทยา มีวุฒิสม . (2547). การพัฒนาวิธีตรวจวัด แอล-กลูตาเมต แบบใหม่ โดยใช้หลักการปฏิกิริยาหมุนเวียน.
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
วิทยา มีวุฒิสม . 2547. "การพัฒนาวิธีตรวจวัด แอล-กลูตาเมต แบบใหม่ โดยใช้หลักการปฏิกิริยาหมุนเวียน".
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
วิทยา มีวุฒิสม . "การพัฒนาวิธีตรวจวัด แอล-กลูตาเมต แบบใหม่ โดยใช้หลักการปฏิกิริยาหมุนเวียน."
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย, 2547. Print.
วิทยา มีวุฒิสม . การพัฒนาวิธีตรวจวัด แอล-กลูตาเมต แบบใหม่ โดยใช้หลักการปฏิกิริยาหมุนเวียน. กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย; 2547.