ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การโคลนและการแสดงออกของเดกซ์แทรนเนสจาก Penicillium pinophilum SMCU 3-14 ในแบคทีเรียและยีสต์

หน่วยงาน จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย

รายละเอียด

ชื่อเรื่อง : การโคลนและการแสดงออกของเดกซ์แทรนเนสจาก Penicillium pinophilum SMCU 3-14 ในแบคทีเรียและยีสต์
นักวิจัย : นิลเนตร อัศวะศิริจินดา
คำค้น : เดกซ์แทรนเนส , การโคลนยีน , การแสดงออกของยีน
หน่วยงาน : จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
ผู้ร่วมงาน : ปาหนัน เริงสำราญ , สุพัฒน์ เจริญพรวัฒนา , จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์
ปีพิมพ์ : 2551
อ้างอิง : http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/19508
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2551

โคลนยีนเดกซ์แทรนเนสจากรา Penicillium pinophilum SMCU 3-14 และนำไปแสดงออกในแบคทีเรียและยีสต์ โดยการแสดงออกในแบคทีเรียมีการเชื่อมต่อกับกรดอะมิโนฮิสทิดีน 6 หมู่ด้านปลายคาร์บอกซีของสายพอลิเพปไทด์ จากนั้นนำไปแสดงออกใน Escherichia coli 2 สายพันธุ์ ได้แก่ BL21(DE3)pLysS และ Rosetta-gami B(DE3)pLysS ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ T7 อีกทั้งยังได้เปรียบเทียบผลของ signal peptide จากราที่มีต่อการแสดงออกในแบคทีเรียสายพันธุ์ดังกล่าว พบว่าเมื่อเปรียบเทียบการเกิดบริเวณใสรอบโคโลนีเมื่อเลี้ยงบนอาหารแข็งที่มีเดกซ์แทรนเกรดอุตสาหกรรม 1% สายพันธุ์ Rosetta-gami B(DE3)pLysS สามารถผลิตเดกซ์แทรนเนสได้มากกว่าสายพันธุ์ BL21(DE3)pLysS และโคลนที่แสดงออกเดกซ์แทรนเนสที่มี signal peptide จากราผลิตเอนไซม์ได้มากกว่าโคลนที่แสดงออกเดกซ์แทรนเนสที่ไม่มี signal peptide ดังนั้นจึงเลือก E. coli สายพันธุ์ Rosetta-gami B(DE3)pLysS ที่แสดงออกเดกซ์แทรน เนสที่มี signal peptide จากราไปหาภาวะที่เหมาะสมในการเลี้ยงเชื้อเพื่อผลิตเดกซ์แทรนเนสในอาหาร minimal medium ที่ให้ผลผลิตสูงที่สุดโดยการวิเคราะห์ผลด้วย SDS-PAGE จากผลการทดลองสรุปได้ว่าภาวะที่เหมาะสมสำหรับผลิตรีคอมบิแนนท์เดกซ์แทรนเนสใน E. coli สายพันธุ์ Rosetta-gami B(DE3)pLysS คือ ที่อุณหภูมิ 37℃ ความเข้มข้น IPTG 25 ไมโครโมลาร์ เป็นเวลา 6 ชั่วโมง จากการทดสอบแอกทิวิตีของรีคอมบิแนนท์เดกซ์แทรนเนสโดยวิธี Blue dextran SDS-PAGE พบว่าหลังจากรีเนเจอร์แล้วเดกซ์แทรนเนสที่ผลิตได้ สามารถย่อยบลูเดกซ์แทรนและเกิดบริเวณใสบนเจลได้ และเมื่อนำรีคอมบิแนนท์เดกซ์แทรนเนสที่ผลิตได้ไปทำให้บริสุทธิ์ โดยโครมาโทกราฟีสัมพรรคภาพ พบว่าเดกซ์แทรนเนสที่ได้มีขนาดประมาณ 68 กิโลดาลตัน สำหรับการแสดงออกในยีสต์ พบว่าเมื่อนำเดกซ์แทรนเนสไปแสดงออกใน Saccharomyces cerevisiae สายพันธุ์ BJ5462 ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ PGK ที่ควบคุมให้มีการแสดงออกตลอดเวลาแล้ว ยีสต์ดังกล่าวสามารถผลิตเดกซ์แทรนเนสและหลั่งออกมาในอาหารเลี้ยงเชื้อ โดยเดกซ์แทรนเนส ดังกล่าวสามารถย่อยเดกซ์แทรนได้

บรรณานุกรม :
นิลเนตร อัศวะศิริจินดา . (2551). การโคลนและการแสดงออกของเดกซ์แทรนเนสจาก Penicillium pinophilum SMCU 3-14 ในแบคทีเรียและยีสต์.
    กรุงเทพมหานคร : จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย.
นิลเนตร อัศวะศิริจินดา . 2551. "การโคลนและการแสดงออกของเดกซ์แทรนเนสจาก Penicillium pinophilum SMCU 3-14 ในแบคทีเรียและยีสต์".
    กรุงเทพมหานคร : จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย.
นิลเนตร อัศวะศิริจินดา . "การโคลนและการแสดงออกของเดกซ์แทรนเนสจาก Penicillium pinophilum SMCU 3-14 ในแบคทีเรียและยีสต์."
    กรุงเทพมหานคร : จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2551. Print.
นิลเนตร อัศวะศิริจินดา . การโคลนและการแสดงออกของเดกซ์แทรนเนสจาก Penicillium pinophilum SMCU 3-14 ในแบคทีเรียและยีสต์. กรุงเทพมหานคร : จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย; 2551.