ridm@nrct.go.th   ระบบคลังข้อมูลงานวิจัยไทย   รายการโปรดที่คุณเลือกไว้

การศึกษาทางชีวเคมีถึงการเชื่อมต่อของกลุ่ม glycosylphosphatidylinositol กับโปรตีน NS1 ในการติดเชื้อไวรัสเด็งกี่

หน่วยงาน สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย


ชื่อเรื่อง : การศึกษาทางชีวเคมีถึงการเชื่อมต่อของกลุ่ม glycosylphosphatidylinositol กับโปรตีน NS1 ในการติดเชื้อไวรัสเด็งกี่
นักวิจัย : นพพร สิทธิสมบัติ
คำค้น : Dengue virus , glycosylphosphatidylinositol , โปรตีน NS1 , ไวรัสเด็งกี่
หน่วยงาน : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย
ผู้ร่วมงาน : -
ปีพิมพ์ : 2554
อ้างอิง : http://elibrary.trf.or.th/project_content.asp?PJID=BRG4980003 , http://research.trf.or.th/node/4711
ที่มา : -
ความเชี่ยวชาญ : -
ความสัมพันธ์ : -
ขอบเขตของเนื้อหา : -
บทคัดย่อ/คำอธิบาย :

Dengue virus (DENV) NS1 exists in multiple forms within, on the cell surface, and in the extracellular compartment of virus-infected cells. Lacking a transmembrane domain, an association of NS1 with cellular membrane remains an enigma. This study is aimed at investigating (i) whether NS1 is present on the cell membrane via an interaction with lipid raft, (ii) whether the glycosylphosphatidylinositol (GPI) linkage is a mechanism responsible for the NS1-membrane association in dengue virus infection and (iii) if it indeed is involved, how much it contributes to the total bulk of the NS1 in dengue virus-infected mammalian cells. Initially, we addressed the objectives (i) and (ii) by performing double immunofluorescence, flotation gradient centrifugation and metabolic labeling of a GPI precursor and subsequent immunoprecipitation. We found that certain portions of NS1 derived from all four serotypes of dengue virus as well as Japanese encephalitis virus (JEV) localize in lipid rafts on the membrane of virus-infected cells. Further study on the association of NS1 and lipid rafts by employing HEK-293T cells stably expressing different forms of recombinant DENV-2 NS1 suggested that DENV-2 NS1 may interact with lipid rafts via a GPI anchor. Attempts were made to verify whether raft-associated NS1 in dengue virus-infected cells is GPI-linked by determination of an incorporation of 3H-inositol, a component of GPI anchor, into the NS1 molecules. Nevertheless, we could not observe any 3H signal from NS1 immunoprecipitated from pooled raft fractions of virus-infected cell lysates after an extended period of 3H detection for 7 months. This may be due to three possibilities: (1) the GPI-linked NS1 may be cell-type dependent and exist at very low levels that could not be detected by the approaches used in this study; (2) raft-association of dengue virus NS1 is mediated by other posttranslational modifications of the protein such as cholesterol linkage, palmitoylation or renylation; (3) a combination of both. Consequently, we further investigated a direct linkage of the NS1 molecules with other lipid moieties using metabolic labeling and immunoprecipitation and explored other possible post-translational modifications of the NS1 molecules by proteomic techniques. Results of metabolic labeling of dengue virus-infected HepG2 cells with 3Hcholesterol and 3H-palmitic acid suggested a potential association of these molecules with NS1; however, proteomic analysis for 52 post-translational modifications did not reveal palmitoylation of NS1 produced from dengue virus-infected HEK-293T cells. Instead, the proteomic results from the same study indicated two possible post-translational modification sites for O-linked glycosylation and farnesylation in dengue virus NS1. More extensive studies with different approaches would be required to confirm the presence of cholesterol-linked, palmitoylated, Oglycosylated and farnesylated NS1 in varying types of dengue virus-infected cells. Inability to detect certain post-translational modifications of NS1, especially those attached to lipid moieties, by the proteomic approaches used in our study may be due to partial hydrophobicity of dengue virus NS1 which renders sample preparation and analysis of digested peptides far more complicated. Taken together, our study demonstrated the presence of raft-associated NS1 in dengue virus-infected cells but the mechanism of this association remained unclear. However, cholesterol linkage, palmitoylation and farnesylation as suggested in this study may be involved in raft-association of dengue virus NS1. Whether O-glycan addition of NS1 is indeed present and plays an important role in dengue virus infection is a novel and intriguing topic to pursue. Therefore, our study not only shed light on new aspects for studying potential post-translational modifications of dengue virus NS1 as well as their related functions, it also provided useful leads for modifications of proteomic approaches suitable to investigate this partially hydrophobic NS1 molecule in the future. The outcome of this research may help in better understanding the biosynthesis, processing and function of NS1 during dengue virus infection.

บรรณานุกรม :
นพพร สิทธิสมบัติ . (2554). การศึกษาทางชีวเคมีถึงการเชื่อมต่อของกลุ่ม glycosylphosphatidylinositol กับโปรตีน NS1 ในการติดเชื้อไวรัสเด็งกี่.
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
นพพร สิทธิสมบัติ . 2554. "การศึกษาทางชีวเคมีถึงการเชื่อมต่อของกลุ่ม glycosylphosphatidylinositol กับโปรตีน NS1 ในการติดเชื้อไวรัสเด็งกี่".
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย.
นพพร สิทธิสมบัติ . "การศึกษาทางชีวเคมีถึงการเชื่อมต่อของกลุ่ม glycosylphosphatidylinositol กับโปรตีน NS1 ในการติดเชื้อไวรัสเด็งกี่."
    กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย, 2554. Print.
นพพร สิทธิสมบัติ . การศึกษาทางชีวเคมีถึงการเชื่อมต่อของกลุ่ม glycosylphosphatidylinositol กับโปรตีน NS1 ในการติดเชื้อไวรัสเด็งกี่. กรุงเทพมหานคร : สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย; 2554.